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大家是如何测定多糖的
季宇彬.《多糖的化学与药理》.北京:人民卫生出版社.2005.5多糖含量测定（1）显色试剂硫酸法：根据单糖、多糖及其衍生物在硫酸作用下水解、脱水生成糖醛类化合物，与酚类、芳胺类等缩合成有色化合物。
苯酚硫酸法生成橙黄色溶液，在490nm处有特征吸收；蒽酮硫酸法生成亮绿色溶液，在630nm处有特征吸收；咔哇硫酸法用于测定糠醛酸（伯醇基氧化：形成糠醛酸，斐林（Fehling）试剂可定量。
苯酚-硫酸试剂可与游离的寡糖、多糖中的己糖、糠醛酸起显色反应，己糖在490nm处（戊糖及糠醛酸在480nm处）有大吸收，吸收值与糖含量呈线性关系）。
显色试剂硫酸法方便简单，但需严格控制水解条件。
（2）DNS法：一个能消除还原性杂质干扰的方法（在氢氧化钠和丙三醇的存在下，还原糖能使DNS还原生成3-氨基-5-硝基水杨酸，在沸水浴中显色2~5min，此化合物在过量的氢氧化钠碱性溶液中呈橘红色，波长在540nm下有大吸收峰，并且吸光度与还原糖含量有线性关系。
试验过程中诸多因素如吸收光谱、显色剂用量、显色时间等均对测定结果有直接影响）。
利用3,5-二硝基水杨酸与多糖水解产物还原糖共热后还原成棕红色氨基化合物，于540nm处有特征吸收。
（主要参考文献：董文慧,等.云芝泰中云芝多糖的工业分析方法.中成药,1990,12(2):33.齐香君,等.3,5-二硝基水杨酸比色法测定溶液中还原糖的研究.纤维素科学与技术.2004,12(3):17~19）（3）滴定法：有斐林氏滴定法，间接碘量滴定法。
（4）气相色谱法：可定性、定量分析多糖的组分及含量，常采用衍生物法以增加其挥发性。
一般是将多糖酸水解物或甲醇解（用盐酸-甲醇）物，用三甲基硅烷基化（TMS）或三氟乙酰化（TFA）转化为硅烷化产物或二酰化产物进行气相色谱分析。
但乙酰化之前，糖先用KBO4或NaBH4作还原成开链的糖醇化合物较好。
多糖用甲醇解方式把半缩醛甲基化，形成甲基糖苷后再TMS化，异构物减少，有利于分辨。
常以甘露醇或肌醇为内标，用已知的各种单糖作标准。
（5）高效液相色谱法：选用TSK、SW凝胶排斥色谱柱为分离柱，样品经简单预处理，在示差折光检测器中进行检测，以不同分子量的标准右旋糖酐作标准，同时测定样品中多糖的分子量分布情况及其含量。
换算因子F的测定参见附件还阳参多糖的定性分析及含量测定.pdf|||常见的方法有：GPC测定多糖分子量及其分布琼脂糖电泳法HPLC方法测定多糖。
不同的方法会有些差异。
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艾滋怎么
艾滋即获得性免疫缺陷综合征(AcquiredImmunodeficiencySyndrome，AIDS)，是由人类免疫缺陷(HumanImmunodeficiencyVirus)所致的一种传染。人类免疫缺陷的靶细胞即CD4细胞(TH细胞)，由于此细胞的受损，导致机体免疫功能破坏，由此而产生一系列机会性和恶性，或其他威胁生命的表现。临床表现有长期不规则发热、消瘦、全身持续性淋巴结肿大、各种机会性和如卡波西肉瘤(Kaposi'sSarcoma)等、末梢CD4细胞减低和清抗-HIV抗体阳性。
【因】
原为人免疫缺陷(HIV)，属逆转录科慢亚科。为正链单股RNA，直径100nm～140nm。电镜下呈球形颗粒。内含核蛋白，有两条单股RNA、逆转录酶和RNA结合蛋白p15。外有衣壳蛋白p24和基质蛋白p18。外有外膜包裹，外膜上有糖蛋白gp120和跨膜蛋白gp41。HIV有HIV-1和HIV-2型两种型。HIV-1型为世界大多数地区流行的艾滋原。HIV-2型主要流行于西非、美国和欧洲一些地区，亦能引起艾滋。
【诊断要点】
(一)临床表现
本的潜伏期长短不一，一般为数月至数年，可长达8～10年。凡有不正当性行为包括同性恋、异性恋和两性恋、注射吸毒者、性人及多次输和制品者如友人，均为艾滋的高危人群。
1.无症状HIV
HIV已人体，但无症状，抗-HIV抗体阳性。此类人称为“HIV携带者”。此可经数月至数年，发展为艾滋。
2.急性
当人体HIV后，部分人可出现急性表现，主要表现为发热、咽痛、出汗、乏力、肌肉、厌食、恶心、、等症状。约半数人出现皮疹，呈斑疹、斑丘疹或荨麻疹，充性，直径4～6mm，主要分布于面、颈及躯干部，四肢较少。并有颈、腋、枕部淋巴结肿大。
3.艾滋相关综合征(AIDSRelatedsyndrome)
有些人仅表现无症状性全身持续性淋巴结肿大，可在颈部、枕部和腋窝等多处淋巴结呈对称性肿大，直径为0.5～2.0cm，无压痛。还可表现为持续数月的不规则发热，并消瘦、盗汗、乏力、和减少性紫癜等。部分人反复出现口腔念珠菌。此类人为早期艾滋，经过一段时间，可发展为典型艾滋。HIV人体后，导致人体免疫功能，尤其是细胞免疫功能严重缺陷，临床表现严重的机会性和如卡波西肉瘤等。
(1)机会性
是艾滋常见的临床表现。多由条件性致微生物如、、真菌和寄生虫引起。易发生机会性的部位有以下几种。
①部：常见的原有卡氏孢子虫、CMV、结核杆菌、念珠菌、新型隐球菌等。以卡氏孢子虫炎常见。起隐袭，有发热、盗汗、消瘦、干咳等，活动后有明显气短。重者静止时有困难、紫绀和衰竭。胸部X线检查，呈间质性炎。痰液、支气管镜吸取分泌物及活检组织检查，可查出孢子虫进行确诊。
②道：有毛状黏膜白斑，口腔、咽部和食道，由隐孢子虫、沙门菌、鸟分枝杆菌、CMV等引起的。
③中枢系统：可由弓形虫、隐球菌、念珠菌、结核杆菌、鸟分枝杆菌、CMV和HSV等引起的脑炎和脑膜炎。有发热、头痛、、颈强直、抽风、偏瘫及神志障碍等。诊断可做脑脊液检查及涂片和培养找原体。
④黏膜：除有口腔念珠菌及毛状黏膜白斑外，可有反复发作口唇、外阴和肛门周围HSV、带状疱疹、尖锐湿疣、等。
⑤：艾滋时，有严重细胞免疫功能缺陷，易发生恶性，常见有卡波西肉瘤、何杰金淋巴瘤、T细胞性淋巴瘤等。
⑥系统变：由于脑细胞和胶质细胞表面也有CD4分子表达，HIV可以脑及细胞。此外，单核和巨噬细胞携带HIV，经脑屏障引起变。因此，约有60%艾滋患者有系统变。常见为亚急性脑炎。亦可发生脊髓炎及末梢炎。
(二)实验室和辅助检查
1.象
有红蛋白及红细胞降低，减少。末梢常下降至4×109/L以下。淋巴细胞数明显减少，可降至1×109/L以下，情愈重，淋巴细胞下降愈明显。
2.淋巴细胞亚群检测
T细胞绝对数下降，CD4+淋巴细胞计数也下降。CD4/CD8<1.0。
3.抗-HIV抗体检测
可用间接免疫荧光(IFA)或酶联免疫吸附法(ELISA)检查清抗-HIV抗体作为过筛实验。因上述方法可出现假阳性，对过筛实验阳性的标本，应进一步作确诊实验。确诊实验有免疫印迹法(Westernblot)和放射免疫沉淀法(RIP)。确诊实验阳性即可诊断为艾滋。
4.HIV分离及培养
可取患者的体液及组织标本作HIV的分离及培养。常用的标本是患者外周单个核细胞(PBMC)与H9传代细胞共同培养。
【急救与】
目前无有效的办法，主要采用以抗HIV为主的综合措施。
(一)抗HIV
1.核苷类逆转录酶抑制剂
①叠氮脱氧胸苷(AZT)：AZT进入细胞后，通过胸腺嘧啶核苷激酶的作用，磷酸化后形成三磷酸AZT，能选择性抑制HIV的逆转录酶，从而抑制HIV的复制和蛋白的合成。剂量为500～600mg/d，分3～5次口服。疗程至少半年。副作用有抑制骨髓，使全细胞减少，热和皮疹等。
②二脱氧肌苷(DDI)和二脱氧胞苷(DDC)：作用机制与AZT相似。剂量：在体重超过50kg者，200mg/次。体重35～49kg者，125mg/次。均为2次/d口服。DDC为0.375～0.75mg/次，3次/d口服。副作用为可诱发胰腺炎、末梢炎、及口腔炎。DDI可诱发癫痫。
③d4T：用于对AZT耐药的HIV者，不良反应有周围炎、功能轻度异常及胰腺炎。
2.非核苷类逆转录酶抑制剂
有nevirapine及pyridinones，可直接抑制HIV-1逆转录酶，但对HIV-2无抗活性。对AZT耐药株有效。易产生耐，常与其他抗HIV药合用。
3.蛋白酶抑制剂
有ritonavir、indinavir和saquinavir。蛋白酶抑制剂与HIV蛋白酶结合后，可抑制HIV的复制。对HIV抑制率可达99%。对AZT耐药的株有效。与AZT及DDC合用有协同作用。但口服生物利用度不高，易于浆蛋白结合，影响其抗HIV活性。
目前抗HIV的，多主张采用几种联合应用或轮换，如AZT、DDI或DDC与蛋白酶抑制剂联合，可以提高抗HIV的疗效及延缓和减少耐的产生。
(二)促进和调整免疫
艾滋有严重免疫缺陷，通过该，可抑制，延缓发，有利于机会性和恶性的防。
1.干扰素α
用于早期HIV和卡波西肉瘤。并可减少机会性的发生。剂量为36～54×106U/次，1次/d，肌肉注射，4周后改为3次/W。疗程为8周。副作用主要有发热、乏力、关节及肌肉酸痛、和减少等。
2.介素2(IL-2)
可使淋巴细胞数增多，提高免疫功能。剂量为0.25～2.5×106U/d，应连续24h静脉滴注，每周5天，共8周。副作用有畏寒、发热、头痛、恶心及全身不适等。
3.其他
还有胸腺素、香菇多糖等。
(三)机会性和卡波西肉瘤的
1.机会性的
(1)卡氏孢子虫炎的
①TMP+SMZ：是本的首选。剂量：TMP20mg/(kg·d)，SMZ100mg/(kg·d)，分3～4次口服或静脉注射。疗程3周。对本的有效率为60%～80%。副作用有发热、皮疹、及减少和功能异常等。
②戊脘脒：有效率可达60%～80%。对TMP+SMZ无效或因毒副作用不能继续者，可用戊脘脒。剂量：4mg/(kg·d)，溶于5%葡萄糖液中，缓慢静脉滴注，应持续1h以上，以免发生低。副作用有降低、功能不全、低及功能不全等。
③氯洁霉素和伯氨喹啉：剂量：氯洁霉素为450～600mg/d，分4次静滴或肌注。伯氨喹啉30mg/d，疗程3周。副作用：氯洁霉素有、道反应和皮疹。伯氨喹啉可引起溶。
④安宁：剂量为750mg/d，分3次口服。疗程3周。副作用有皮疹。
(2)弓形虫
可用乙胺嘧啶，首剂75mg，以后25mg/次，1次/d口服。磺胺嘧啶100～200mg/(kg·d)，分4次口服。两药联合，疗程2～3周。副作用有发热、药疹、尿等，部分人可发生减少。
(3)隐孢子虫
螺旋霉素1g/d，分3～4次口服。疗程3～6周。可减轻，但虫体常不能清除。
(4)隐球菌脑膜炎
可用两性霉素B0.2～0.6mg/(kg·d)，静脉滴注，与5-氟尿嘧啶100～150mg/(kg·d)，分4次口服，联合8周。有效率为60%～70%，但复发率高。
(5)念珠菌口腔炎及食道炎
可口服克霉唑1g/d～3g/d或酮康唑200～400mg/d，分2次口服。
(6)抗疱疹
有全身CMV、HSV、EBV和带状疱疹(VZV)。表现脑炎、炎和损害等。可用无环尿苷(Acyclovir)，剂量为15～20mg/(kg·d)，静脉滴注。疗程10～14天。丙氧鸟苷(ganciclovir)每次5mg/kg，1次/8h，静脉滴注。疗程2～4周。副作用有道反应及降低。
(7)鸟分枝杆菌的
环丙沙星0.25～0.75g/次，分2次/d口服。氯苯吩嗪100mg/次，1次/d口服。乙胺丁醇15mg/(kg·d)，和利福平600mg/d，分2次口服，两药联合。疗程与抗结核相同。
2.卡波西肉瘤的
可用长春新碱、博莱霉素、阿霉素等单用或联合。也可用干扰素α30～50×106U/次，每日或隔日一次，皮下或肌肉注射。也可用放射。
(四)中医
近年来中医辨证施对调整患者的全身情况，提高人体的免疫功能和改善症状，取得一定的疗效。一些如天花粉蛋白、紫花地丁、甘草素、香菇多糖等对HIV有抑制作用。人参、当归、女贞子等的提取物，灵芝、云芝多糖等能改善人体的免疫功能，提高CD4阳性细胞的数量和功能。因此中医HIV值得深入研究。
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